Neposredno odkrivanje imunofluorescence

Dokazi o tkivnih strukturah, protitelesih in patogenih z imunskim označevanjem so priljubljeni, moderni in natančni. Imunofluorescenca se nanaša na označevanje imunskih pripravkov s pripravljenimi fluorescentnimi protitelesi, ki se svetijo pod UV svetlobo.

Pri Neposredno odkrivanje imunofluorescence substrat pregledamo neposredno s svetlobnimi protitelesi, brez primarnih protiteles ali umetnih antigenov.

Kaj je neposredno odkrivanje imunofluorescence?

Neposredno odkrivanje imunofluorescence je diagnostična metoda, ki temelji na poznavanju imunologije, imuno obarvanja in imunohistokemije. Poudarek je na sposobnosti protiteles, da se vežejo na določene točke v tkivu ali na antigene v serumu. Ti kraji so epitopi.

V biokemijski diagnostiki obstajajo umetna protitelesa ali mimetiki (singularno: mimetični), ki omogočajo, da se te protitelesno-antigenske vezi označijo s fluorescenco ali radioaktivnostjo. Konjugati umetnih protiteles se na eni strani vežejo na epitope, na drugi strani pa imajo fluorescenčni marker v primeru imunofluorescence. To je alternativa uporabi radioaktivnih markerjev. Posebnost pri neposrednem odkrivanju imunofluorescence v primerjavi z indirektnim odkrivanjem je, da protitelo, ki se na preiskovani material veže na epitop antigena, prav tako predstavlja konjugat protiteles s fluorescentnim markerjem. Dodatna protitelesa niso potrebna za neposredno odkrivanje.

Fluorescein, ki sveti pod UV svetlobo, in fluoresceinski izotiocianat (FITC) se uporabljata kot barvila za pripravo umetnih protiteles v konjugatih z imunofluorescenco. Zaenkrat je zapisano nekoliko zapleteno, vendar je neposredno odkrivanje imunofluorescence standardna metoda laboratorijske diagnostike za najrazličnejša zdravstvena vprašanja. Protitelesa s fluorescentnim barvilom so pripravljena za prodajo.

Funkcija, učinek in cilji

Za preiskave tkiv za obarvanje nekaterih struktur v tkivu je na voljo neposredno odkrivanje imunofluorescence. So pa na voljo tudi za posamezne celice. Tu igra pomembno vlogo pretočna citometrija. Na koncu so še imunski testi trde in tekoče faze. Imunofluorescenčni pregledi tkiv so še posebej pomembni pri onkologiji, to je medicinskem zdravljenju rakavih obolenj.

Tumorsko specifične antigene v tumorskem tkivu lahko odkrijemo neposredno z imunofluorescenco. Ti pregledi na vzorcih tkiv iz tumorjev so pogosto pomembni, da bi ugotovili, od kod prihajajo obstoječe metastaze v telesu, ali da bi lahko presodili, ali je tumor benigni ali maligni. Pregled posameznih celic z neposrednim imunofluorescenčnim odkrivanjem se uporablja za iskanje virusnih antigenov, bakterijskih antigenov in drugih epitopov.

Na primer, lahko ugotovite, ali so celice okužene z virusom in v kateri fazi okužbe so celice. Ime FACS (= Fluorescentno razvrščanje celic) je zelo učinkovita metoda protočne citometrije, pri kateri se celice, označene s fluorescenco, porazdelijo v različne epruvete, odvisno od vrste barve. Ta postopek je pomemben pri imunologiji, hematologiji in nalezljivih boleznih.

Imunofluorescentne imunske analize omogočajo neposredno odkrivanje strupov iz okolja, gensko spremenjenih organizmov in nekaterih dodatkov v hrani. V tej poskusni namestitvi je vedno trdna in tekoča faza. Številne patogene, vključno z virusom HIV, ki povzroča aids, bi lahko tudi neposredno odkrili. Pri odkrivanju nalezljivih in avtoimunskih bolezni pa gre pogosto za odkrivanje protiteles in ne za antigene. To so obrambne molekule, ki jih tvori imunski sistem telesa. Glede na predstavljeno definicijo takšni dokazi niso neposredni dokazi, saj se fluorescentna protitelesa ne vežejo neposredno na telesne lastne antigene, ampak na antigene testne ureditve.

Ti antigeni v poskusni sestavi so nato povezani s telesnimi lastnimi protitelesi. Neposredno odkrivanje imunofluorescence za običajne okužbe, na primer viruse HIV in klamidijo, se uporablja samo v posebnih testih odkrivanja in potrditve. Obstajajo testi za veliko več bolezni. V večini primerov je za nalezljive bolezni primernejše posredno odkrivanje protiteles, saj ima telesni lastni imunski sistem iznajdljivo sposobnost spominjanja prejšnjih okužb. V drugih situacijah se direktno odkrivanje antigenov in posredno odkrivanje protiteles dopolnjujeta. Slednje kažejo, da se je okužba pojavila že prej, medtem ko prve zagotavljajo natančnejše podatke o trenutnem stanju aktivnosti patogena.

Tu lahko najdete svoja zdravila

Tveganja, neželeni učinki in nevarnosti

Tako kot pri vseh medicinskih dokazih z neposrednim odkrivanjem imunofluorescence obstajata dve nevarnosti: tveganje lažnega, pozitivnega rezultata in tveganje lažnega, negativnega rezultata. Lažni, pozitivni rezultati povzročajo psihološko nelagodje in velik stres za pacienta.

Zato se pozitivnim rezultatom dodajo dodatni preskusni postopki, zlasti če diagnoza vodi do drastičnih življenjskih sprememb. Nevarnost lažnega, negativnega rezultata je, da se pacient pravočasno ne seznani z grožnjo svojemu zdravju in morda celo javnemu zdravju. Zato je dobro opraviti veliko raziskav ter narediti in ponuditi veliko različnih neposrednih imunofluorescentnih odkrivanj, pripravljenih za prodajo. Skupaj z drugimi neposrednimi in posrednimi metodami odkrivanja bolezni in patologij to povečuje natančnost diagnoze.

Neposredno odkrivanje temelji na konjugatu protiteles, ki se na eni strani veže na epitope antigenov, na drugi strani pa povzroča tudi fluorescenco. Tak izdelek se zato uporablja samo v eni vrsti preskusnega postopka in se ne uporablja za druge vrste preskusnega postopka.To je pomembna proceduralna razlika pri posrednih dokazih, v katerih pred fluorescentnimi protitelesi primarna protitelesa za vezavo epitopov. Konjugat protiteles je zato primeren za različne teste. Ta proceduralna razlika je drugačna od medicinske razlike med posrednim odkrivanjem protiteles in neposrednim odkrivanjem antigenov.